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RNA保存的彻底解决方案

发布时间:2021-10-25      点击次数:221

一旦生物样品被收集采摘,它的RNA会立刻变得非常不稳定,极易被降解。由于特异及非特异的RNA降解,或者由于应激反应产生新的RNA都会引起RNA状态的改变。对于生物芯片基因表达矩阵分析(Array Analysis)、定量RT-PCR等实验来说,采
样后立即稳定样品里的RNA以保存当时RNA的表达状态,是精确/定量研究基因表达分析的重要前提。为了达到这个目的,往往需要将液氮或者干冰带到采样现场,采样后立即运回实验室保存。对于实验者来说,无论是采样还是将样品取出以抽提RNA都非常不方便。QIAGEN公司最新推出的RNeasy Protect Kits提供一种RNAlater RNA Stabilization Reagent,只要在采样后立即加入这种试剂,即可保护样品中的RNA完整而不被降解。在RNAlater中的样品RNA可以在37度下稳定保存1天,或者在18—25度保存7天,2—8度稳定4周,或者在-20度永jiu保存。这种技术为在不同温度下采样,运输和保存样品提供了极大的方便,特别适用于各种动物组织培养细胞、细菌、白细胞,但必须说明的是它不适用于全血或体液中RNA的保存。


RNAlater的用法非常简单,只要在采样后立即将样品完全浸入适量(10ul/1mg组织)的RNAlater中即可。取样的动作要尽量快速利索,组织样品的大小以不超过0.5公分厚为宜,对于一些小的组织如小鼠的脾、肾等器官则可以整个取出浸入溶液中,较大的则应切开为厚度小于0.5公分的小块,以确保RNAlater能迅速扩散渗透入组织块中的所有细胞中。采样的容器应该足够大以容纳10倍于组织重量的溶液,避免组织块挤在一起,同时建议将溶液加满容器以避免在运输过程中组织块露出液面。注意本试剂只适用于新鲜样品,对于冷藏和包埋的样品请选用RNeasy Kit。

保存后的样品可以直接用于RNA或者mRNA的抽提。RNAlater不会影响组织块的结构,可以在室温下切出适量的组织块用于称量和抽提RNA,剩下的部分可用于继续保存样品。-20度冻存的样品可以取出在室温下进行称量等操作而无需干冰。在-20度冻存的样品反复冻融20次RNA依然保持完好无损。RNAlater处理的样品比新鲜组织稍微硬一点,但对不会影响匀浆过程。取出适量的样品即可开始加RLT缓冲液进行匀浆化。和传统的RNeasy Kit一样,RNeasy Protect Kits采用硅胶膜纯化柱技术,迅速特异地吸附样品裂解液中的RNA,经过洗涤除去各种杂质,不用酚氯仿抽提,不用乙醇沉淀或LiCl沉淀,也不用CsCl超离,只要洗脱即可得到纯的RNA,样品量根据样品量、所选的试剂盒型号可达100微克,或者1毫克,甚至6毫克。

通常情况下RNeasy的纯化技术足以除去绝大部分的DNA,而无需额外进行DNaes处理,但是对于一些对痕量DNA非常敏感的实验,用RNase-Free DNase Set(QIAGEN cat.no.79254)可以直接在纯化柱上消化DNA残留,在随后的洗涤步骤中除去DNase,最后洗脱得到不含DNA的纯RNA。

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