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淋巴细胞的采集、培养心得技巧-BD肝素钠抗凝采血管

发布时间:2021-11-11      点击次数:441

第一就是要稀释。我们要留血浆(肝素钠抗凝的采血管采的血,5~6ml),所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水,一般3ml左右,混匀。

第二,分离液不在乎体积有多少,主要是高度,如果离心管很粗的话(呵呵,挺吃亏的),就要多加一些,细一点的离心管就可以少加一些,一般高度要超过3cm。

第三,看你要分离的血是什么来源的,成人外周血比较好分,脐血和胎盘血不好分。当然,发生溶血和凝血的话就更难分了。

第四,血的保存很重要,采血后不要放到4度冰箱(当然更不能冻啦),常温,避光即可。从采血到分离不要超过12个小时,不然效果也不好。

第五,就是离心的速度和时间。不同的离心机,肯定转速不一样的,我们实验室一般用水平离心机2500转,20分钟,基本上没有红细胞了,淋巴细胞也很多。这一条要自己多试试。

第六,淋巴细胞分离液的保存不必放在4度,常温即可,无论是否开封了的。我们试过,分离液一放到4度后,无论复温的效果如何,分离的效果都没以前好。

1.用0.85%生理盐水对倍稀释抗凝血液标本。

2.取淋巴细胞分离液3-4ml于干净试管中。

3.往淋巴细胞分离液上层缓缓加入2倍于分离液体积的稀释外周血量。

4.2000-2500RPM转速离心15分钟。

5.用吸管吸取中层白色浑浊液于eppendorf管-20℃保存待用。

注意事项:

1、取血的质量很重要,分离界面清楚的总是血样质量好的(实验室人自己献的),我们用Hanks对倍稀释!分离液一般是稀释血量的1/2!

2、离心时间很有关系各实验室离心机不同,自己摸索一下就好了!

3、破碎红细胞我们用双蒸水少于一分钟。

4、试管的干净程度也有关系的。


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