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BD全血RNA管762165正确的使用方法

发布时间:2022-01-18      点击次数:144
  BD全血RNA管762165使用方法:
  1.将0.2-1.5mL新鲜或解冻后的抗凝全血加入到1.5mL塑料离心管中。
  2.12,000rpm室温离心3分钟,弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于0.2mL,则需要减少血液的使用量,具体减少量需根据具体情况决定,因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。
  3.将1mL溶液A加入到血液细胞沉淀中,用移液枪吹打沉淀使细胞裂解。
  4.将0.3mL的溶液B加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
  5.和0.2mL氯仿加入到离心管中,剧烈震荡30秒。
  6.12,000rpm室温离心3-5分钟,将上清液(为无色或浅红色,约0.5-0.9mL)转移到另一干净离心管中。为防止污染,建议留100uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色,中间层为白色,含有DNA,蛋白质和其他细胞破碎物,避免触及或吸取。
  7.在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自备氯仿,用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
  8.室温12,000rpm离心3分钟,两相间将有白色膜状物(蛋白质)形成。
  9.将上清液(约1mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,避免触及或吸取有机相及其上面的白色膜状物。
  10.在上清液中加入0.5倍体积的溶液D,用手上下颠倒或振荡器振荡30秒混匀。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
  BD全血RNA管762165具有下列特点:
  1.比血液RNAOUT更加简单快捷,直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品,不需裂解红细胞等任何预处理步骤,整个提取过程只需要十分钟左右,可以全在室温下进行。
  2.产量和纯度更高,OD260/280均在2.0左右,产率一般为2-5ug/mL人血。
  3.每次微量提取的样品处理量可以达到1.5mL,高于进口的同类产品。
  4.与常用的抗凝剂(包括肝素,EDTA,柠檬酸钠,草酸钠)兼容,得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern杂交等研究。
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