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细胞冻存需要经过那些过程

发布时间:2022-10-08      点击次数:285
  细胞冻存前需要做什么预处理吗
  01在细胞被消化和离心后,去除上清液并收集细胞沉淀,它们通常需要用冷冻保存液再次悬浮并转移到冷冻保存管中。冻存液中一般含有渗透型的保护液如甘油或10%的二甲基亚砜(DMSO)和10%-90%胎牛血清。
  02细胞内外的主要成分是水。如果细胞在没有保护溶液的情况下直接冷冻,细胞内外的水会凝结成冰晶,对细胞造成内源性的机械损伤。细胞内的水凝结引起的细胞脱水也会引起细胞内pH值的变化、蛋白质变性、细胞内部器官功能的丧失,甚至细胞核内的DNA损伤,最终可能导致细胞死亡。
  03而冻存液往往都是易溶解的小分子物质,具有细胞渗透性,可以穿过细胞膜,进入细胞内,降低冰点,同时又可以提高细胞膜对水的通透性,使得细胞内水分渗出到细胞外,从而减少细胞内冰晶的形成。
  在准备冷冻靶细胞之前,必须确保细胞处于最佳生长状态,这可以通过以下指标进行观察:
  1培养基的颜色和浑浊情况
  培养基的颜色可以指示细胞是否过度生长(例如,如果细胞是黄色,则表示它们过度生长);介质的浑浊度通常表明存在污染,不适合冷冻。
  2细胞培养的时间
  通常,建议将新恢复的细胞冷冻约两周。如果细胞连续培养两个月以上,性状率会发生一些变化,此时的细胞不适合冷冻。
  3细胞的数目
  在冻存过程中,每只冻存管内细胞最佳浓度为5x10^6个/ml—1x10^7个/ml,高密度或低密度对细胞存活率有一定影响。当细胞数量不足时,不建议冷冻细胞。
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