细胞冻存需要经过那些过程

　　细胞冻存前需要做什么预处理吗

　　01在细胞被消化和离心后，去除上清液并收集细胞沉淀，它们通常需要用冷冻保存液再次悬浮并转移到冷冻保存管中。冻存液中一般含有渗透型的保护液如甘油或10%的二甲基亚砜(DMSO)和10%-90%胎牛血清。

　　02细胞内外的主要成分是水。如果细胞在没有保护溶液的情况下直接冷冻，细胞内外的水会凝结成冰晶，对细胞造成内源性的机械损伤。细胞内的水凝结引起的细胞脱水也会引起细胞内pH值的变化、蛋白质变性、细胞内部器官功能的丧失，甚至细胞核内的DNA损伤，最终可能导致细胞死亡。

　　03而冻存液往往都是易溶解的小分子物质，具有细胞渗透性，可以穿过细胞膜，进入细胞内，降低冰点，同时又可以提高细胞膜对水的通透性，使得细胞内水分渗出到细胞外，从而减少细胞内冰晶的形成。

　　在准备冷冻靶细胞之前，必须确保细胞处于最佳生长状态，这可以通过以下指标进行观察：

　　1培养基的颜色和浑浊情况

　　培养基的颜色可以指示细胞是否过度生长(例如，如果细胞是黄色，则表示它们过度生长)；介质的浑浊度通常表明存在污染，不适合冷冻。

　　2细胞培养的时间

　　通常，建议将新恢复的细胞冷冻约两周。如果细胞连续培养两个月以上，性状率会发生一些变化，此时的细胞不适合冷冻。

　　3细胞的数目

　　在冻存过程中，每只冻存管内细胞最佳浓度为5x10^6个/ml—1x10^7个/ml，高密度或低密度对细胞存活率有一定影响。当细胞数量不足时，不建议冷冻细胞。