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Universal通用植物总RNA提取试剂盒的使用提取步骤

发布时间:2022-11-11      点击次数:130
通用植物总RNA提取试剂盒适用于普通植物组织细胞的总RNA提取。采用裂解液可以迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,结合多次柱漂洗的方式,可提取没有蛋白、细胞代谢物等杂质污染的高纯度、高质量的总RNA。
提取步骤:
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,使得核酸蛋白复合物分离。
2.可选步骤:12,000rpm离心10分钟,小心取上清转入一个新的RNase free的离心管中。(当样品富含多糖或是植物的块茎部分时可能需要此额外的分离步骤)。
3.每1ml裂解液RL加200μl氯仿。盖紧样品管盖,剧烈振荡15秒,室温静置3分钟。
4.在4°C12,000rpm离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上清水相,RNA存在于上清水相中。把上清水相转移到新管中(不要触碰中间层)。
5.加入上清水相0.5倍体积的无水乙醇,立即吹打混匀。
6.转入套有收集管的吸附柱RA中,12,000rpm 离心45秒,弃掉废液。
7.加500μl去蛋白液RE,12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
8.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm离心45秒,弃掉废液。
9.重复步骤7次。
10.将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液),放入新的RNase-free离心管中,在吸附膜的中间部位加50 ~ 80μl RNase-free H2O,室温静置2分钟,12,000 rpm离心1分钟,取得RNA后,将RNA溶液保存在-80°C,防止降解。
 
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