组织细胞RNA提取试剂盒可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
特点:
无污染:整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性:适用于提取动物组织和培养细胞总RNA。
易操作:操作简便,提取过程仅需30分钟左右。
安全性:无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱:含有特异性吸附柱。通过漂洗-离心-洗脱的步骤提取。
高质量:有效保证RNA的完整性,回收RNA效率高,纯度高,没有蛋白和其他杂质污染。OD260/OD280的比值可达1.9~2.2,可用于各种分子生物学实验。
提取步骤:
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,13000rpm离心3分钟,会有杂质沉淀。
2.将上清液转入套有基因组DNA清除柱的离心管中。不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁,注意不能将其带入离心管中。)
3.13000rpm离心60秒,保留滤过液(RNA在滤过液中)。
4.估计滤过液体积,加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇)立即吹打混匀。
5.将混合溶液(每次小于700μl)滴入套有吸附柱RA的离心管中,13000rpm离心30秒,弃掉废液。
6.加700μl去蛋白液RW1,室温放置1分钟,12000rpm离心30秒,弃掉废液。
7.加500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心30秒,弃掉废液。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液),放入新的RNase-free离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase-free H2O室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在-80°C。