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BD762165全血RNA管操作步骤

发布时间:2022-12-13      点击次数:85
  红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗一离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除。
 
  RNA提取应该说已经成为了一种常见的分子生物学操作步骤了,传统的血液标本表达谱芯片实验需要先把有核细胞从全血中分离出来,加白细胞分离液、离心等步骤,比较繁琐,如果能进行全血的提取,那就再好不过。
 
  BD762165操作步骤:
 
  1.红细胞裂解液的稀释:根据处理血液样品的体积选取适当体积的10×红细胞裂解液(例如待处理的血液样品体积为200l,则取140ul10×红细胞裂解液),用RNase-free ddH20稀释至1×红细胞裂解液。
 
  2.向1体积人类全血中加5倍体积1×红细胞裂解液(需自备合适的干净管子)。
 
  注意:为获得最佳的混匀效果,血液和1×红细胞裂解液的混合液体积不应超过管子体积的3/4。如果血液中的白细胞含量较高,可按比例减小血液的使用体积,第6步中的裂解液RL的使用体积也要进行相应调整。
 
  3.在冰上孵育10-15分钟,在孵育过程中涡旋振荡混匀2次。
 
  注意:在孵育的过程中溶液将变成半透明状态,表明红细胞裂解。如果必要的话,孵育时间可延长至20分钟。
 
  4.4℃2,100rpm(~400×g)离心10分钟,将上清去除。注意:离心后白细胞可能会形成小球,确保去除上清,痕量红细胞的存在,会使白细胞小球呈现红色,而该现象会在随后的漂洗步骤中消失。
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