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HyPure组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒

简要描述:HyPure组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒,适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。

  • 产品型号:2105
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2021-10-31
  • 访  问  量:86

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详细介绍

HyPure组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。无需有毒的苯酚/氯仿抽提/乙醇沉淀等步骤,基因组DNA清除柱有效清除gDNA残留,无需DNase消化,无DNA残留,也无杂质残留,RNA纯度极高,适合于对纯度要求很高的下游实验,如real-time RT-PCR和RNA-Seq。

HyPure™组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒(离心柱型)

HyPure™ Tissue&Cell RNA/DNA Kit


包装规格:


2105AHyPure™组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒20次840元
2105BHyPure™组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒50次1690元
2105CHyPure™组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒200次6420元



本产品仅用于科研,禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。

产品介绍:
HyPure™组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒,可快速从同一个动物细胞或组织样品中同时提取DNA和RNA,无需苯酚、氯仿等有机试剂。采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,通过基因组DNA吸附柱时,DNA会吸附在吸附柱内,而RNA会滤过,通过后续的多次柱漂洗的方式,可在40分钟左右,同时提取纯度高,没有杂质污染,互不干扰的DNA和RNA。


RNA可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种实验。

产品特点:
无污染:整套试剂盒采用RNase-Free处理。
特殊性:适用于动物组织和培养细胞,可同时提取互不干扰的RNA和DNA。
易操作:操作简便,提取过程仅需 40分钟左右。 
安全性:无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。
吸附柱:含有特异性吸附柱。通过漂洗-离心-洗脱的步骤提取。
高质量:有效保证RNA/DNA的完整性,回收RNA /DNA效率高,纯度高,没有蛋白和其他杂质污染。可用于各种分子生物学实验。

操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
洗脱缓冲液EB在65°C~70°C水浴锅中预热,效果更佳。 

样品处理:
1.动物组织:取新鲜或-80°C冻存动物组织尽量剪碎,加入350μl(< 20mg组织)或600μl (20 ~ 30mg组织)的裂解液RLT Plus,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入合适裂解液RLT Plus混匀。
2.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液RLT Plus裂解细胞,按培养板面积每10cm2加1ml裂解液RLT Plus,用取样器吹打混匀。用移液器反复吹打 ,直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。
3.悬浮细胞:离心收集细胞。加入350μl裂解液RLT Plus(<5×106细胞)或者600μl裂解液RLT Plus(5×106 ~ 1×107细胞),。用移液器反复吹打,直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤,避免mRNA降解。

提取步骤:
1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,13,000rpm离心3分钟,会有杂质沉淀。
2.将上清液转入套有基因组DNA吸附柱DA的离心管中。(不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁,注意不能将其带入离心管中。)
3.13,000 rpm离心60秒。保留滤过液(RNA在滤过液中)和保留吸附柱DA(DNA在吸附柱中)。
(此时将分开实验,建议先提取RNA,吸附柱DA短时间可存放4°C度备用。)


提取RNA步骤:
4.估计滤过液体积,加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇)立即吹打混匀。
5.将混合溶液(每次小于700μl)转入套有吸附柱RA的离心管中,13,000 rpm离心30秒,弃掉废液。
6.加700μl 去蛋白液RW1,室温静置1分钟,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
7.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。
8.重复步骤7一次。
9.将吸附柱RA放回收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液),放入新的RNase-free离心管中,在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase - free H2O室温静置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在-80°C。
洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。

提取DNA步骤:
11.在步骤3的吸附柱DA中加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
12.加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
13.加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
14.将吸附柱DA放回收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
15.取出吸附柱DA,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB (洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好), 室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于50μl,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
16.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。


HyPure组织细胞RNA/DNA分离提取试剂盒


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