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HyPure组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取

简要描述:HyPure组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒,适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA和Protein,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。

  • 产品型号:2106
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2021-11-11
  • 访  问  量:62

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详细介绍

HyPure组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒,适用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA和Protein,不需要使用DNase消化,RNA可直接用于反转录PCR,荧光定量PCR。无需有毒的苯酚/氯仿抽提/乙醇沉淀等步骤,基因组DNA清除柱有效清除gDNA残留,无需DNase消化,无DNA残留,也无杂质残留,RNA纯度极高,适合于对纯度要求很高的下游实验,如real-time RT-PCR和RNA-Seq。


HyPure™组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒(离心柱型)

HyPure™ Tissue&Cell RNA/DNA/Protein Kit


包装规格:


2106AHyPure™组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒20次960元
2106BHyPure™组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒50次1890元
2106CHyPure™组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒200次7180元



本产品仅用于科研,禁止用于医药、临床医疗、食品和化妆品等用途。


产品介绍:
HyPure™组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒,可快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取DNA、RNA和Protein。无需苯酚、氯仿等有机试剂。用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,通过基因组DNA吸附柱时,DNA会吸附在吸附柱内,而RNA和Protein会滤过,通过后续的多次柱漂洗的方式。可在60分钟左右,同时提取纯度高,没有杂质污染,互不干扰的DNA、RNA和Protein。

得到的RNA产物可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。基因组DNA也可用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。Protein可用于SDS-PAGE电泳或者western blot 等试验。



产品特点:

无污染:整套试剂盒采用RNase-Free处理。

特殊性:适用于动物组织和培养细胞,可同时提取互不干扰的总RNA和基因组DNA。

易操作:操作简便,提取过程仅需 60分钟左右。

安全性:无需使用苯酚、氯仿等有机试剂。

吸附柱:含有特异性吸附柱。通过漂洗-离心-洗脱的步骤提取。

高质量:有效保证RNA/DNA/Protein的完整性,回收RNA /DNA/Protein效率高,纯度高,没有蛋白和其他杂质污染。可用于各种分子生物学实验。



操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

洗脱缓冲液EB在65°C~70°C水浴锅中预热,效果更佳。



样品处理:

1.动物组织:取新鲜或-80°C冻存动物组织尽量剪碎,加入350μl(< 20mg组织)或600μl (20 ~ 30mg组织)的裂解液RLT,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨成细粉后,取研磨组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl组织裂解液RLT的1.5ml离心管中,剧烈振荡混匀或者200μl吸头吹打混匀。

2.贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液RLT裂解细胞,按培养板面积每10cm2加1ml裂解液RLT,用取样器吹打混匀。用移液器反复吹打, 直到看不到明显的细胞团为止。裂解液加入量不足会有DNA污染。

3.悬浮细胞:离心收集细胞。加入350μl裂解液RLT(<5×106细胞)或者600μl裂解液RLT(5×106 ~ 1×107细胞)。 用移液器反复吹打,直到看不到明显的细胞团为止。不需要洗涤,避免mRNA降解。



提取步骤:

1.将处理后的样品在室温静置5~10分钟,13,000rpm离心3分钟,会有杂质沉淀。

2.将上清液转入套有基因组DNA吸附柱DA的离心管中。(不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能会黏附在枪头的外壁,注意不能将其带入离心管中。)

3.13,000 rpm离心60秒,保留滤过液(RNA和Protein在过滤液中)、吸附柱DA(DNA在吸附柱中)。

(此时将分开实验,建议先提取RNA,吸附柱DA短时间可存放4°C度备用。Protein提取从RNA提取步骤5中分离。)



提取RNA步骤:

4.估计滤过液体积,加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇),立即吹打混匀。

5.将混合溶液(每次小于700μl)滴入套有吸附柱RA的离心管中,13,000 rpm离心30秒。(保留滤过液以备提取Protein)

6.将吸附柱RA套入新的离心管中,加700μl 去蛋白液RW1,室温静置1分钟,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

7.加入500μl漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm 离心30秒,弃掉废液。

8.重复步骤7一次。

9.将吸附柱RA放回收集管中,13,000 rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应,弃掉废管。

10.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的废液),放入新的RNase - free离心管中,在吸附膜的中间部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室温静置1分钟,12,000 rpm 离心1分钟。洗脱后的RNA可立即使用或保存在-80°C,防止降解。



提取DNA步骤:

11.在步骤3的吸附柱DA上加入500μl抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

12.加入700μl漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

13.加入500μl漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

14.将DNA吸附柱DA放入收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

15.取出DA吸附柱(避免吸附柱DA的底部碰到收集管里面的废液),放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB, 室温静置3 ~ 5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱 中,室温静置2分钟,12,000rpm离心1分钟。洗脱后的DNA可立即使用或保存在-20°C,防止降解。



提取Protein步骤:

16.将步骤5的滤过液中加入滤过液等体积的缓冲液APP,涡旋振荡混匀,室温静置15分钟沉淀Protein。

17.13,000rpm离心5~10分钟,小心弃上清。加入500μl 70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇),颠倒后离心1分钟,留下蛋白沉淀,尽量将上清液体用移液器吸干净。

18.室温晾干沉淀5~10分钟,让乙醇挥发干净,以免下影响游试验。

19.将蛋白沉淀溶解于30~150μl 1×蛋白上样缓冲液或其它下游试验要求的缓冲液。

20.95°C放置5分钟溶解和变性蛋白,回复到室温,最高速离心1分钟。


HyPure组织细胞RNA/DNA/Protein分离提取试剂盒



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